當(dāng)前位置： 首頁(yè) - 產(chǎn)品目錄 - 生化試劑盒
Ca++Mg++-ATP酶檢測(cè)試劑盒（微量法100T/48S）
| 貨號(hào) | SH0255 | 售價(jià)（元） | 504 |
| 規(guī)格 | 100T/48S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
|
貨號(hào) |
名稱(chēng) |
規(guī)格 |
|
SH0255 |
Ca++ Mg++- ATP酶活性檢測(cè)試劑盒（微量法100T/48S） |
100管/48樣 |
測(cè)定意義：
Ca++ Mg++-ATP酶廣泛分布于植物、動(dòng)物、微生物和細(xì)胞中，可催化ATP水解生成ADP和無(wú)機(jī)磷。測(cè)定原理：
根據(jù)Ca++ Mg++-ATP酶分解ATP生成ADP及無(wú)機(jī)磷，通過(guò)測(cè)定無(wú)機(jī)磷的量來(lái)確定ATP酶活性高低。
試劑的組成和配制：
|
產(chǎn)品名稱(chēng) |
SH0255-100T/48S |
Storage |
|
提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
|
試劑一：液體 |
10ml |
4℃ |
|
試劑二：粉劑 |
1瓶 |
-20℃ |
|
試劑三：液體 |
2ml |
4℃ |
|
試劑四：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
|
試劑五：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
|
試劑六：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
|
試劑七：液體 |
25ml |
室溫 |
|
試劑八：10mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液 |
10ml |
4℃ |
|
說(shuō)明書(shū) |
一份 |
|
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入6ml蒸餾水充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存。用時(shí)加入3ml蒸餾水， 4℃保存；
試劑五：粉劑×1瓶, 4℃保存。用時(shí)加入25ml蒸餾水，溶解后4℃保存一周；
試劑六：粉劑×1瓶, 4℃保存。用時(shí)加入25ml蒸餾水，溶解后4℃保存一周；
0.5μmol/ml標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液配制：將試劑八 20倍稀釋?zhuān)慈?0.1ml試劑八加1.9ml蒸餾水充分混勻；
定磷劑的配制：按H2O: 試劑五:試劑六:試劑七=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷劑應(yīng)為淺黃色。若無(wú)色則試劑失效，若是藍(lán)色則為磷污染，定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。
注意：配試劑最好用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
需自備的儀器及用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣品酶液的制備：
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
操作步驟：
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至660nm，蒸餾水調(diào)零。
2、酶促反應(yīng)（在EP管中加入下列試劑）
|
|
對(duì)照管 |
測(cè)定管 |
|
試劑一（μl） |
65 |
45 |
|
試劑二（μl） |
60 |
60 |
|
試劑三（μl） |
|
20 |
|
樣本 （μl） |
|
100 |
混勻，37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其他物種）準(zhǔn)確水浴10min
|
試劑四（μl） |
25 |
25 |
|
樣本 （μl） |
100 |
|
混勻，8000g，25℃離心10min，取上清液
3、定磷（在EP管或96孔板中加入下列試劑）
|
|
空白管 |
標(biāo)準(zhǔn)管 |
對(duì)照管 |
測(cè)定管 |
|
0.5μmol/ml標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液（μl） |
|
20 |
|
|
|
上清液（μl） |
|
|
20 |
20 |
|
蒸餾水（μl） |
20 |
|
|
|
混勻，室溫放置30min，在 660nm處，記錄各管吸光值。
注意事項(xiàng)
1、由于每一個(gè)樣都必須做對(duì)照，本試劑盒100管只能測(cè) 48份Ca++ Mg++-ATP酶。
2、此法具有微量、靈敏、快速的特點(diǎn)。所以對(duì)測(cè)定所用試管要求嚴(yán)格無(wú)磷。避免磷污染是檢測(cè)成敗的關(guān)鍵。
3、空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只要做一管。
Ca++ Mg++- ATPase活力的計(jì)算：
1、血清（漿）Ca++ Mg++- ATPase活力的計(jì)算:
定義：每小時(shí)每毫升血清（漿）中Ca++ Mg++- ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1μmol無(wú)機(jī)磷的量為一個(gè)酶活力單位。
Ca++ Mg++-ATP酶活力（μmol/h/ml）= [C標(biāo)準(zhǔn)管×V總]×（A測(cè)定管-A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷V樣÷T=7.5×（A測(cè)定管-A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中Ca++ Mg++- ATPase活力的計(jì)算：
（1）按蛋白濃度計(jì)算：
定義：每小時(shí)每毫克組織蛋白中Ca++ Mg++- ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1μmol無(wú)機(jī)磷的量為一個(gè)酶活力單位。
Ca++ Mg++-ATP酶活力(μmol/h / mg prot)= [C標(biāo)準(zhǔn)管×V總]×（A測(cè)定管-A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷（V樣×Cpr）÷T =7.5×（A測(cè)定管-A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
定義：每小時(shí)每克組織中Ca++ Mg++-ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1μmol無(wú)機(jī)磷的量為一個(gè)酶活力單位。
Ca++ Mg++-ATP酶活力(μmol/h /g 鮮重)=[C標(biāo)準(zhǔn)管×V總]×（A測(cè)定管-A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷(W× V樣÷V樣總)÷T=7.5×（A測(cè)定管-A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
定義：每小時(shí)每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞中Ca++ Mg++-ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1μmol無(wú)機(jī)磷的量為一個(gè)酶活力單位。
Ca++ Mg++-ATP酶活力(μmol/h /104 cell)= [C標(biāo)準(zhǔn)管×V總]×（A測(cè)定管-A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.015×（A測(cè)定管-A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）
C標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.5μmol/ml；V總：酶促反應(yīng)總體積，0.25ml；V樣：加入樣本體積，0.1ml ；V樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時(shí)間，1/6小時(shí)；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本鮮重，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬(wàn)。