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羥甲基戊二酰輔酶A合成酶（HMGCS）檢測試劑盒（微量法 100T/96S）
| 貨號 | SH0248 | 售價（元） | 8160 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0248 |
羥甲基戊二酰輔酶A合成酶（HMGCS）檢測試劑盒（微量法 100T/96S） |
100管/96樣 |
測定意義：
羥甲基戊二酰輔酶A合成酶是甲羥戊酸代謝途徑中的關鍵酶，催化乙酰CoA與乙酰乙酰CoA生成羥甲基戊二酰CoA。
測定原理：
HMGCS催化乙酰CoA與乙酰乙酰CoA生成羥甲基戊二酰CoA，同時產(chǎn)生CoASH，使DTNB轉(zhuǎn)化為黃色的TNB，在412nm下有特征吸光值。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0248-100T/96S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：粉劑 |
1瓶 |
-20℃避光 |
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試劑二：粉劑 |
1瓶 |
-20℃避光 |
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試劑三：液體 |
6ml |
4℃避光 |
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說明書 |
一份 |
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試劑一：粉劑×1瓶，-20℃避光保存；臨用前加入3ml蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃避光保存；臨用前加入3ml蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
自備儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣本測定的準備：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至412nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 在微量石英比色皿或96孔板中加入25μl試劑一、25μl試劑二和50μl試劑三，混勻，加入100μl樣本上清，迅速混勻后記錄412nm下初始吸光值A1和4min后的吸光值A2。計算ΔA＝A2-A1。
HMGCS活性計算：
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、血清（漿）活性
單位定義：每ml血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1nmolTNB為一個酶活力單位。
HMGCS（nmol/min /ml）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣 ÷T=36.76×ΔA
2、組織、細菌或細胞HMGCS活性
(1) 按樣本蛋白濃度計算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmolTNB為一個酶活力單位。
HMGCS（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=36.76×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmolTNB為一個酶活力單位。
HMGCS（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W ×V樣÷V樣總）÷T=36.76×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算
單位定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmolTNB為一個酶活力單位。
HMGCS（nmol/min /104 cel）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（500×V樣÷V樣總）÷T=0.074×ΔA
V反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：TNB摩爾消光系數(shù)，1.36×104 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.1 ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應時間，4 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細胞或細菌總數(shù)，500萬。
用96孔板測定的計算公式如下：
1、血清（漿）活性
單位定義：每ml血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1nmolTNB為一個酶活力單位。
HMGCS（nmol/min /ml）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣 ÷T=73.53×ΔA
2、組織、細菌或細胞HMGCS活性
(1) 按樣本蛋白濃度計算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmolTNB為一個酶活力單位。
HMGCS（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=73.53×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmolTNB為一個酶活力單位。
HMGCS（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W ×V樣÷V樣總）÷T=73.53×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算
單位定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmolTNB為一個酶活力單位。
HMGCS（nmol/min /104 cel）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（500×V樣÷V樣總）÷T=0.147×ΔA
V反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：TNB摩爾消光系數(shù)，1.36×104 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.1 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，4 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細胞或細菌總數(shù)，500萬。