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磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶檢測(cè)試劑盒(分光光度法 50T/48S)
| 貨號(hào) | SH0221 | 售價(jià)（元） | 696 |
| 規(guī)格 | 50T/48S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0221 |
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC)試劑盒分光光度法 50T/48S) |
50管/48樣 |
測(cè)定意義：
PEPC（EC 4.1.1.31）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和細(xì)胞中，是催化磷酸烯醇式丙酮酸與二氧化碳反應(yīng)生成草酰乙酸呈不可逆反應(yīng)的酶，對(duì)三羧酸循環(huán)的運(yùn)轉(zhuǎn)起重要調(diào)節(jié)作用。
測(cè)定原理：
PEPC催化磷酸烯醇式丙酮酸和CO2生成草酰乙酸和HPO42-，蘋(píng)果酸脫氫酶進(jìn)一步催化草酰乙酸和NADH生成蘋(píng)果酸和NAD+，在340nm測(cè)定NADH減少速率，計(jì)算PEPC活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0221-50T/48S |
Storage |
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提取液：液體 |
60ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
30ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
10ml |
4℃ |
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試劑三：粉劑 |
2支 |
-20℃ |
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試劑四：粉劑 |
1支 |
-20℃ |
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試劑五：原液 |
20μl |
4℃ |
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試劑五：稀釋液 |
10ml |
4℃ |
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說(shuō)明書(shū) |
一份 |
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自備儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 ml石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
樣本的前處理：
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
3、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 試劑五工作液的配制：將試劑五原液：試劑五稀釋液=1μl:329μl稀釋，用多少配多少。
3、 將試劑一、二、三、四和試劑五工作液置于37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)預(yù)熱5分鐘。
加樣表：
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試劑名稱(μl) |
測(cè)定管 |
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試劑一 |
500 |
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試劑二 |
150 |
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試劑三 |
150 |
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試劑四 |
95 |
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試劑五工作液 |
95 |
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樣本 |
20 |
將上述試劑按順序加入1 ml石英比色皿中，立即混勻，加樣本的同時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)，340 nm波長(zhǎng)下記錄初始吸光度A1和反應(yīng)5分鐘后的吸光度A2。計(jì)算ΔA=A1-A2。
注意事項(xiàng)：如果一次性測(cè)定樣本數(shù)較多，可將試劑一、二、三、四、和試劑五工作液按比例配成混合液。
PEPC活性計(jì)算：
1、血清（漿）PEPC活力計(jì)算
單位定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PEPC（nmol/min/ml））＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=1624×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中PEPC活力計(jì)算
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PEPC（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=1624×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PEPC（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總)÷T=1624×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PEPC（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=3.248×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，1.010×10-3 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.02 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬(wàn)。
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