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糖化酶(Glucoamylase)檢測試劑盒（微量法100T/48S）
| 貨號(hào) | SH0219 | 售價(jià)（元） | 1320 |
| 規(guī)格 | 100T/48S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0219 |
糖化酶(Glucoamylase)檢測試劑盒（微量法100T/48S） |
100管/48樣 |
測定意義：
糖化酶，即葡萄糖淀粉酶（EC3.2.1.3），又稱γ-淀粉酶，是一種外切型糖苷酶，它從淀粉的非還原性末端水解α-1,4糖苷鍵和α-1,6糖苷鍵，將淀粉完全水解為葡萄糖，因此廣泛的應(yīng)用于酒精、白酒、抗生素、氨基酸、有機(jī)酸，甘油，淀粉糖等工業(yè)中，是我國重要的工業(yè)酶制劑之一。
測定原理：
糖化酶水解可溶性淀粉生成葡萄糖，與3,5-二硝基水楊酸生成紅棕色化合物，在540nm處有最大光吸收，在一定范圍內(nèi)反應(yīng)液顏色深淺與葡萄糖的量成正比，可測定計(jì)算得糖化酶的活力。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0219-100T/48S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
10ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
10ml |
4℃避光 |
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說明書 |
一份 |
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自備儀器和用品：
天平、低溫離心機(jī)、研缽、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
酶液提?。?/span>
1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1ml提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上待測。
2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上待測。
3. 培養(yǎng)液或其它液體：直接檢測。
測定操作：
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對(duì)照管 |
測定管 |
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樣本（μl） |
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10 |
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滅活樣本（μl） |
10 |
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試劑一（μl） |
100 |
100 |
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充分混勻，40℃反應(yīng)20min |
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試劑二（μl） |
90 |
90 |
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混勻，沸水浴5min，自來水冷卻后，于微量石英比色皿/96孔板，蒸餾水調(diào)零，測定540nm處吸光值A，△A=A測定管-A對(duì)照管 |
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酶活性計(jì)算公式：
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.2164x - 0.0182，R2 = 0.9992
a. 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
1. 按照蛋白含量計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH4.6條件下，每毫克蛋白每分鐘分解可溶性淀粉產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
糖化酶活性（U/mg prot）=（△A+0.0182）÷ 0.2164×V反總÷（V樣×Cpr）÷T
= 2.54×（△A+0.0182）÷ Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH4.6條件下，每克組織每分鐘分解可溶性淀粉產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
糖化酶活性（U/g）=（△A+0.0182）÷ 0.2164×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T
= 2.54×（△A+0.0182）÷ W
3. 按照液體體積計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH4.6條件下，每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解可溶性淀粉產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
糖化酶活性（U/ml）=（△A+0.0182）÷ 0.2164×V反總÷V樣÷T
= 2.54×（△A+0.0182）
4. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH4.6條件下，每104個(gè)細(xì)胞每分鐘分解可溶性淀粉產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
糖化酶活性（U/104cell）=（△A+0.0182）÷ 0.2164×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）÷V樣總）÷T
= 2.54×（△A+0.0182）÷ 細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）
V反總：反應(yīng)總體積，0.11ml，V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.01ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，20min
b. 用96孔板測定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.1082x - 0.0182，R2 = 0.9992
1. 按照蛋白含量計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH4.6條件下，每毫克蛋白每分鐘分解可溶性淀粉產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
糖化酶活性（U/mg prot）=（△A+0.0182）÷ 0.1082×V反總÷（V樣×Cpr）÷T
= 5.08×（△A+0.0182）÷ Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH4.6條件下，每克組織每分鐘分解可溶性淀粉產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
糖化酶活性（U/g）=（△A+0.0182）÷ 0.1082×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T
= 5.08×（△A+0.0182）÷ W
3. 按照液體體積計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH4.6條件下，每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解可溶性淀粉產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
糖化酶活性（U/ml）=（△A+0.0182）÷ 0.1082×V反總÷V樣÷T
= 5.08×（△A+0.0182）
4. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH4.6條件下，每104個(gè)細(xì)胞每分鐘分解可溶性淀粉產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
糖化酶活性（U/104cell）=（△A+0.0182）÷ 0.1082×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）÷V樣總）÷T
= 5.08×（△A+0.0182）÷ 細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）
V反總：反應(yīng)總體積，0.11ml，V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.01ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，20min
注意事項(xiàng)：
1. 滅活樣本的制備建議將樣本放在沸水浴中煮沸10min，以將酶徹底滅活。
2. 測定之前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，若吸光值較高，請將樣品用提取液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屧贉y定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。