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葡萄糖脫氫酶（GCDH）檢測(cè)試劑盒（微量法 100T/96S）
| 貨號(hào) | SH0191 | 售價(jià)（元） | 1260 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0191 |
葡萄糖脫氫酶（GCDH）檢測(cè)試劑盒（微量法 100T/96S） |
100管/96樣 |
測(cè)定意義：
GCDH（EC 1.1.1.47）催化D-葡萄糖和NAD(P)生成D-葡萄糖酸和NAD(P)H，大量存在于高等動(dòng)物的肝臟和弱氧化醋桿菌中。在低聚果糖生產(chǎn)中使用GCDH，不僅能去除低聚果糖中的葡萄糖提高低聚果糖的含量，而且生成的葡萄糖酸與鈣離子結(jié)合生成的葡萄糖酸鈣是一種理
想的補(bǔ)鈣制劑。因而，GCDH已成為制備高含量低聚果糖的理想用酶。
測(cè)定原理：
GCDH催化D-葡萄糖和NAD生成D-葡萄糖酸和NADH，在340nm下測(cè)定NADH上升速率，即可反映GCDH活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0191-100T/96S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
19ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
1瓶 |
-20℃ |
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說明書 |
一份 |
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自備儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣本的前處理：
組織的前處理：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞的前處理：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零；
2、 工作液的配制：臨用前將試劑二轉(zhuǎn)移到試劑一中混合溶解待用；用不完的試劑4℃可保存一周；
3、 將工作液置于37℃預(yù)熱5分鐘。
4、 在1ml石英比色皿中加入10μl樣本和190μl工作液，立即混勻，記錄340nm處初始吸光值A1和1min后的吸光值A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。
GCDH活性計(jì)算：
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
GCDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=3215×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位定義：每g組織每分鐘生成1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
GCDH（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總)÷T=3215×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
GCDH（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=6.43×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬(wàn)。
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
GCDH（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位定義：每g組織每分鐘生成1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
GCDH（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總)÷T=6430×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
GCDH（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=12.86×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.05cm；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬(wàn)。
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