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纖維素酶（CL）檢測(cè)試劑盒（分光光度法50T/24S）
| 貨號(hào) | SH0176 | 售價(jià)（元） | 720 |
| 規(guī)格 | 50T/24S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0176 |
纖維素酶（CL）檢測(cè)試劑盒（分光光度法50T/24S） |
50管/24樣 |
測(cè)定意義：
CL（EC 3.2.1.4）存在于細(xì)菌、真菌和動(dòng)物體內(nèi)，能夠催化纖維素降解，是一類可廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、棉紡、環(huán)保及可再生資源利用等領(lǐng)域的酶制劑。
測(cè)定原理：
采用蒽酮比色法測(cè)定CL催化羧甲基纖維素鈉降解產(chǎn)生的還原糖的含量。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0176-50T/24S |
Storage |
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提取液：液體 |
50ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
6ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
40ml |
4℃ |
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試劑三：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存； 臨用前加入5ml蒸餾水和45ml濃硫酸充分溶解待用。
自備儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml玻璃比色皿、研缽、冰、濃硫酸和蒸餾水。
樣品測(cè)定的準(zhǔn)備：
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
3、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至620nm，蒸餾水調(diào)零。
2、加樣表（在EP管中依次加入下列試劑）：
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試劑名稱 |
對(duì)照管 |
測(cè)定管 |
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樣本 |
100 |
100 |
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試劑一（μl） |
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180 |
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試劑二（μl） |
740 |
740 |
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蒸餾水（μl） |
360 |
180 |
37℃振蕩反應(yīng)1h后，90℃水浴15min（蓋緊，防止水分散失），冷卻后
8000g 25℃離心10min，取上清，得糖化液
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糖化液 (μl) |
350 |
350 |
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試劑三 (μl) |
650 |
650 |
混勻， 90℃水浴10min（蓋緊，防止水分散失），冷卻，620nm處蒸餾水調(diào)零，測(cè)定吸光值A，計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
CL活力計(jì)算：
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 5.018x - 0.0462；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/ml），y為吸光值。
2、血清（漿）CL活力的計(jì)算
單位的定義：每ml血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
CL活力(μg /min/ml)= [1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V反總]÷V樣÷T =39.8×(ΔA+0.0462)
3、細(xì)胞、細(xì)菌和組織中CL活力的計(jì)算
（1）按照蛋白濃度計(jì)算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
CL活力(μg /min/mg prot)=[1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V反總]÷(V樣×Cpr) ÷T
=39.8×(ΔA+0.0462) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
CL活力(μg /min /g鮮重)=[1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V反總]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T
=39.8×(ΔA+0.0462) ÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
單位的定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
CL活力(μg /min /104 cell)=[1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V反總]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T
=0.0796×(ΔA+0.0462)
1000：1mg/ml=1000ug/ml；V反總：反應(yīng)體系總體積，1.2ml； V樣：加入樣本體積，0.1 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，60 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。
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