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正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定                                             

測(cè)定意義：

山梨醇廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，不僅是糖運(yùn)輸形式之一，而且與生物抗逆性和食物風(fēng)味密切相關(guān)。因此，在糖代謝、抗逆性和食品研究中經(jīng)常需要檢測(cè)山梨醇含量變化。

測(cè)定原理：

山梨醇在堿性溶液中與銅離子形成藍(lán)色絡(luò)合物，在655nm波長(zhǎng)有特征吸收峰。

組成：

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

山梨醇的提?。?/span>

按照組織質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml蒸餾水），研磨成勻漿，95℃水浴10分鐘（蓋緊，以防止水分散失），冷卻后，8000g，25℃離心10min，取上清液待測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至655nm，蒸餾水調(diào)零。

2、加樣表（在EP管中依次加入下列試劑）：

混勻后室溫靜置15min，8000g，25℃離心10min，取200μl上清液至微量石英比色皿或96孔板中，測(cè)655nm下吸光值A，計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A空白管。空白管只要做一管。

山梨醇含量計(jì)算：

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為y = 0.352x - 0.002；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/ml），y為吸光值。

2、按照樣品質(zhì)量計(jì)算

山梨醇含量（mg /g 鮮重）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.352×V1]÷(W×V1÷V2)=2.84×(ΔA＋0.002) ÷W

3、按照樣本蛋白濃度計(jì)算

山梨醇含量（mg /mg prot）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.352×V1]÷(V1×Cpr)=2.84×(ΔA＋0.002) ÷Cpr

V1：加入樣本體積，0.23ml；V2：加入提取液體積，1 ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g

b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為y = 0.176x - 0.002；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/ml），y為吸光值。

2、按照樣品質(zhì)量計(jì)算

山梨醇含量（mg /g 鮮重）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.176×V1]÷(W×V1÷V2)=5.68×(ΔA＋0.002) ÷W

3、按照樣本蛋白濃度計(jì)算

山梨醇含量（mg /mg prot）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.176×V1]÷(V1×Cpr)=5.68×(ΔA＋0.002) ÷Cpr

V1：加入樣本體積，0.23ml；V2：加入提取液體積，1 ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g

注意：最低檢測(cè)限為1μg/g鮮重或0.01μg /mg prot