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亮氨酸氨基肽酶（LAP）檢測試劑盒（微量法 100T/96S）
| 貨號 | SH0150 | 售價(jià)（元） | 1680 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0150 |
亮氨酸氨基肽酶（LAP）檢測試劑盒（微量法 100T/96S） |
100管/96樣 |
正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
LAP是一類能水解肽鏈N-末端為亮氨酸的酶，廣泛存在于肝、腎、胰等組織中，尤其以肝臟中含量最為豐富。各類肝病患者因肝細(xì)胞損傷，血清LAP的活性均有不同程度的升高，因此，血清LAP活性的檢測能從不同側(cè)面反映各種肝病的發(fā)生和發(fā)展。
測定原理：
LAP分解L-亮氨酰對硝基苯胺生成對硝基苯胺，后者在405nm有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計(jì)算LAP活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0150-100T/96S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
15ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
1瓶 |
-20℃ |
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說明書 |
1份 |
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自備儀器和用品：
酶標(biāo)儀/可見分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
樣品的前處理：
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為1000~5000：1的比例（建議2000萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
LAP測定步驟：
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至405nm，蒸餾水調(diào)零。
2、將試劑二轉(zhuǎn)移至試劑一中充分溶解（如較難溶解，可50℃水浴加熱約30min促進(jìn)溶解）；在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min以上；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
3、在微量石英比色皿或96孔板中加入50μl樣本和150μl試劑一，混勻后立即記錄405nm處初始吸光值A1和 2min后的吸光值A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。
注意事項(xiàng)：若ΔA大于0.5，需將酶液用提取液稀釋，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。使A2-A1小于0.5，可提高檢測靈敏度。
LAP活力單位的計(jì)算：
a.用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
1、血清（漿）LAP活力的計(jì)算:
單位的定義：每ml血清（漿）每分鐘生成1 nmol的對硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。
LAP（nmol/min/ml）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中LAP活力的計(jì)算:
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。
LAP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。
LAP（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。
LAP（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：對硝基苯胺摩爾消光系數(shù)，9.72×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.05 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；2000：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，2000萬。
b.用96孔板測定的計(jì)算公式如下
1、血清（漿）LAP活力的計(jì)算:
單位的定義：每ml血清（漿）每分鐘生成1 nmol的對硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。
LAP（nmol/min /ml）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=411.5×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中LAP活力的計(jì)算:
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。
LAP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷ (V樣×Cpr) ÷T=411.5×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。
LAP（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=411.5×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。
LAP（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.206×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：對硝基苯胺摩爾消光系數(shù)，9.72×103 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.05 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，2min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；2000：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，2000萬。
GOT（nmol/min/mg prot）=[（ΔA+0.0013）÷0.2384×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =209.7×（ΔA+0.0013）÷Cpr
需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。
（2） 按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。
GOT（nmol/min/g鮮重）=[（ΔA+0.0013）÷0.2384×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =209.7×（ΔA+0.0013）÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。
GOT（nmol/min/104 cell）= [（ΔA+0.0013）÷0.2384×V1]÷(500×V1÷V2)÷T×103 =0.419×（ΔA+0.0013）
V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.01ml；V2：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，20 min；Cpr：蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬；103：1umol/ml=103 nmol/ml。
1、標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為：0.01 umol/ml -2 umol/ml。
2、ΔA線性范圍為：0.01 -1。