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磷酸葡萄糖脫氫酶（6PGDH）檢測(cè)試劑盒（微量法 100T/96S）
| 貨號(hào) | SH0120 | 售價(jià)（元） | 384 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0120 |
6-磷酸葡萄糖脫氫酶（6PGDH）檢測(cè)試劑盒（微量法 100T/96S） |
100管/96樣 |
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
磷酸戊糖途徑途徑中6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）和6PGDH依次催化NADPH合成，與能量的平衡、生長(zhǎng)速率和細(xì)胞活力等密切相關(guān)。此外，6PGDH逆境生理中具有重要作用。
測(cè)定原理：
6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH，NADPH在340 nm有特征吸收峰，而NADP+沒(méi)有；通過(guò)測(cè)定340nm吸光度增加速率，計(jì)算6PGDH活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0120-100T/96S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
19ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
1瓶 |
-20℃避光 |
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試劑三：粉劑 |
1瓶 |
-20℃ |
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說(shuō)明書 |
一份 |
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自備儀器和用品：
低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、酶標(biāo)儀、96孔板和蒸餾水。
粗酶液提?。?/span>
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為1000~5000：1的比例（建議2000萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟：
1. 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm。
2將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移至試劑一中充分溶解；在37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴10min以上；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
3. 取96孔板，依次加入10μl樣本190μl試劑一，于340nm處測(cè)定3min內(nèi)吸光值變化，第10 s吸光值記為A1，第190s吸光值記為A2。△A=A2-A1
注意：空白管只需要做一次。
6-PGDH酶活性計(jì)算：
使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、血清（漿）6PGDH活力的計(jì)算:
單位的定義：每ml血清（漿）每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
6PGDH（nmol/min/ml）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=2143.6×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中6PGDH活力的計(jì)算:
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
6PGDH（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=2143.6×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
6PGDH（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=2143.6×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
6PGDH（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=1.072×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，1×10-3 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.05 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，3 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；2000：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，2000萬(wàn)。
注意事項(xiàng)：
1. 配制好的工作液4℃穩(wěn)定7天，請(qǐng)配制后盡快使用。
2. 血清的CK不穩(wěn)定，采集樣本后盡快測(cè)定，4℃避光保存可穩(wěn)定24h。
3. 樣品蛋白質(zhì)含量需要另外測(cè)定，可選用BCA蛋白含量測(cè)定試劑盒進(jìn)行測(cè)定。
4. OD值大于0.5可用提取液適當(dāng)稀釋樣品，并在計(jì)算公式中相應(yīng)的改變稀釋倍數(shù)。
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