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測(cè)定意義：

羥自由基作用于體內(nèi)蛋白質(zhì)、核酸、脂類等生物分子，造成細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能受損，進(jìn)而導(dǎo)致體內(nèi)代謝紊亂引起疾病。羥自由基清除能力是樣品抗氧化能力的重要指標(biāo)之一，在抗氧化類保健品和藥品研究中得到廣泛應(yīng)用。

測(cè)定原理：

H₂O₂/ Fe²⁺ 通過Fenton反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基，將鄰二氮菲- Fe²⁺水溶液中Fe²⁺氧化為Fe³⁺ ，導(dǎo)致536nm吸光度下降，樣品對(duì)536nm吸光度下降速率的抑制程度，反映了樣品清除羥自由基的能力。

組成：

自備儀器和用品：

恒溫水浴鍋、可見分光光度計(jì)、1 ml玻璃比色皿和蒸餾水。

樣品的制備：

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2. 血清、果汁等液體樣品可直接測(cè)定。

3. 提取物（或者藥物）可配制成一定濃度，如5 mg/ml。

測(cè)定操作表

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至536nm，蒸餾水調(diào)零。

2、工作液配制：使用之前按照每管試劑一：試劑二：試劑三=300:150:300（μl）的比例配制，用多少配多少，混勻。

3、在EP管中加入如下試劑

注意：空白管和對(duì)照管只需測(cè)定一次。

計(jì)算公式

羥自由基清除率 D% =（A測(cè)-A對(duì)）÷（A空-A對(duì)）×100%

A空、A對(duì)、A測(cè)：空白管、對(duì)照管和測(cè)定管的吸光值。

注意事項(xiàng)

為了比較不同樣品羥自由基清除能力，對(duì)于同一批樣品必須加入等量的樣品，血清、組織勻漿、果汁等液體樣品加入同樣體積，提取物（或者藥物）配制成同樣濃度。