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單寧酶（TAN）檢測(cè)試劑盒（微量法 100T/48S）
| 貨號(hào) | SH0039 | 售價(jià)（元） | 1344 |
| 規(guī)格 | 100T/48S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0039 |
單寧酶（TAN）檢測(cè)試劑盒（微量法 100T/48S） |
100管/48樣 |
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
單寧酶全稱是單寧酯酰水解酶(Tannase，EC 3.1.1.20)，它可以水解沒食子酸單寧中的酯鍵和縮酚羧鍵，生成沒食子酸和葡萄糖
測(cè)定原理：
使用抗氧化劑沒食子酸丙酯（PG）作為單寧酶酶促反應(yīng)的底物，在270nn下測(cè)定底物PG反應(yīng)前后的光密度變化，計(jì)算單寧酶酶活力。
試劑的組成和配制：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0039-100T/48S |
Storage |
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試劑一：液體 |
100m×2 |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
1支 |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑二：粉劑×1支，4℃保存；臨用前每支加入6ml試劑一，充分溶解后備用；用不完的試劑4℃保存。
需自備的的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研缽、冰、蒸餾水
粗酶液提取：
按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml試劑一），進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
液體樣本：直接取上清測(cè)定。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至270nm，蒸餾水調(diào)零。
2、加樣表：
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試劑名稱（μl） |
對(duì)照管 |
測(cè)定管 |
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95℃水浴5min后滅活的粗酶液 |
50 |
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粗酶液 |
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50 |
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試劑二 |
50 |
50 |
混勻，40℃準(zhǔn)確保溫10 min后，置95℃水浴中10 min（蓋緊，防止水分散失），冷卻，
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試劑一 |
900 |
900 |
混勻，取200uL至微量石英比色皿或96孔UV板中，270nm處讀取各管吸光值。計(jì)算ΔA=A對(duì)照-A測(cè)定。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)個(gè)一個(gè)對(duì)照管。
注意事項(xiàng)：
1、可以在不同對(duì)照管中加入不同樣品的粗酶液，然后集中進(jìn)行5min 95℃沸水浴處理。
2、務(wù)必使用96孔UV板（非普通酶標(biāo)板，普通酶標(biāo)板只能透過可見光，不能透過紫外光，檢測(cè)波長小于340nm務(wù)必使用UV板）。
TAN活力單位的計(jì)算：
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為y = 0.0058x + 0.0044，R2 = 0.9994；x為PG含量（μmol/L），y為吸光值。
1、按樣本體積計(jì)算
單位的定義：40℃下每毫升粗酶液每分鐘水解減少0.01μmol底物PG所需要的酶量定義為一個(gè)酶活單位。
TAN活性(μmol/min/ml)=(ΔA-0.0044）÷0.0058÷1000×V反總÷0.01÷V樣÷T
=34.48×( ΔA-0.0044）
2、按照蛋白濃度計(jì)算
單位的定義：40℃下每毫克蛋白每分鐘水解減少0.01μmol底物PG所需要的酶量定義為一個(gè)酶活單位(U)。
TAN活性((μmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0044）÷0.0058÷1000×V反總÷0.01÷(V樣×Cpr)÷T
=34.48×(ΔA-0.0044）÷Cpr
3、按照樣本鮮重計(jì)算
單位的定義：40℃下每克樣品每分鐘水解減少0.01μmol底物PG所需要的酶量定義為一個(gè)酶活單位(U)。
TAN活性(μmol/min/g 鮮重)=(ΔA-0.0044）÷0.0058÷1000×V反總÷0.01÷(V樣÷V樣總×W)÷T
=34.48×(ΔA-0.0044）÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，1ml； V樣：加入樣本體積，0.05ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，10min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g。
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為y = 0.0029x + 0.0044，R2 = 0.9994；x為PG含量（μmol/L），y為吸光值。
1、按樣本體積計(jì)算
單位的定義：40℃下每毫升粗酶液每分鐘水解減少0.01μmol底物PG所需要的酶量定義為一個(gè)酶活單位(U)。
TAN活性(μmol/min/ml)=(ΔA-0.0044）÷0.0029÷1000×V反總÷0.01÷V樣÷T
=68.97×( ΔA-0.0044）
2、按照蛋白濃度計(jì)算
單位的定義：40℃下每毫克蛋白每分鐘水解減少1μmol底物PG所需要的酶量定義為一個(gè)酶活單位(U)。
TAN活性(μmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0044）÷0.0029÷1000×V反總÷0.01÷(V樣×Cpr)÷T
=68.97×( ΔA-0.0044）÷Cpr
3、按照樣本鮮重計(jì)算
單位的定義：40℃下每克樣品每分鐘水解減少0.01μmol底物PG所需要的酶量定義為一個(gè)酶活單位(U)。
TAN活性(μmol/min/g 鮮重)=(ΔA-0.0044）÷0.0029÷1000×V反總÷0.01÷(V樣÷V樣總×W)÷T
=68.97×( ΔA-0.0044）÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，1ml； V樣：加入樣本體積，0.05ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，10min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g。