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HOLMES ssDNA reporter (FAM)
| 貨號 | 31101 | 售價（元） | 800 |
| 規(guī)格 | 1 OD | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
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產(chǎn)品描述
HOLMES ssDNA reporter (FAM)是單鏈DNA寡核苷酸探針，5′端標記FAM熒光報告基團 (Reporter)，3′端標記熒光淬滅基團 (Quencher)。當HOLMES ssDNA reporter探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號會被淬滅基團淬滅。而當HOLMES ssDNA reporter探針被切斷后，5'端的FAM熒光報告基團和淬滅基團分離，從而發(fā)出可被檢測的熒光信號。常見的Cas12a、Cas12b和Cas12f在與guide RNA、target DNA組成三元復合物后，都會被激活針對ssDNA的反式剪切活性，因此HOLMES ssDNA reporter (FAM)可以作為Cas12家族反式剪切的底物，通過發(fā)出放大的熒光信號指示特異靶標的存在。
HOLMES ssDNA reporter (FAM)探針經(jīng)過特別的序列優(yōu)化，對Cas12a、Cas12b和Cas12f反式切割活性高度敏感，可作為Cas12家族反式剪切的報告探針，被廣泛用于CRISPR診斷反應體系以便對靶標核酸進行快速檢測。
實驗流程
1.反式剪切實驗體系
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組分 |
體積 |
終濃度 |
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10 × HOLMES Buffer 1 |
2 μL |
1 × |
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10 μM Cas12 Nuclease |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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10 μM guide RNA |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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10 μM Target DNA |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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10 μM HOLMES ssDNA reporter (FAM) |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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Nuclease-free water |
Up to 20 μL |
◆ 反式剪切體系中各組分的用量可以根據(jù)不同的實驗目的進行調(diào)整，用量較少時可先將各組分稀釋后加入體系；
◆ 建議使用低吸附的離心管、吸頭等耗材；
◆ 反式剪切體系中探針的用量和預期反應到達平臺期的時間可參考各批號Cas酶transU的具體數(shù)值，詳見本公司提供的COA檢測報告。
實時熒光定量PCR儀檢測熒光信號，每30 sec采集一次熒光信號，反應溫度根據(jù)不同的Cas12酶最適溫度進行設定。
產(chǎn)品組分
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組分 |
31101 |
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1 OD |
a.HOLMES ssDNA reporter (FAM)總量為1 OD (約為11.53 nmol)，為干粉狀態(tài)。使用前請先短暫離心，然后加入115.3 μL DNase/RNase-Free Water溶解，得到濃度為100 μM的貯存液，在無反復凍融的條件下可于-80℃避光保存6～12個月。使用前再將貯存液用DNase/RNase-Free Water稀釋成10 μM的工作液，按下表推薦的濃度加入CRISPR剪切反應體系中。剩余工作液可于-20℃避光保存，3～6個月內(nèi)使用。
保存條件
-20℃避光儲存；≦4℃運輸。