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ProteoStat 蛋白聚集小體檢測(cè)試劑盒

貨號(hào) ENZ-51035-0025 售價(jià)（元） 詢價(jià)
規(guī)格 25T CAS號(hào)
  • 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
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產(chǎn)品信息

貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

ENZ-51035-K100

ProteoStat? Aggresome detection kit ProteoStat? 蛋白聚集小體檢測(cè)試劑盒

100T

ENZ-51035-0025

ProteoStat? Aggresome detection kit ProteoStat? 蛋白聚集小體檢測(cè)試劑盒

25T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

      聚集小體（Aggresome）是由一群不正常堆疊在一起的蛋白質(zhì)所形成的包涵體（Inclusion Bodies）。聚集小體的出現(xiàn)往往也表明細(xì)胞正處于某種應(yīng)激狀態(tài)，比如高溫、病毒感染、活性氧自由基攻擊等。聚集體通過(guò)隔離毒性，聚集蛋白質(zhì)，還可以通過(guò)自噬促進(jìn)細(xì)胞代謝。提供細(xì)胞保護(hù)功能。

研究人員人文與人類疾病相關(guān)的某些細(xì)胞包涵體來(lái)自于聚集小體的反應(yīng)，包括與阿爾茨海默氏病相關(guān)的細(xì)胞內(nèi)外的聚集小體、與帕金森氏病的神經(jīng)元相關(guān)的路易體、與酒精性肝病的干細(xì)胞相關(guān)的馬洛里小體、與肌萎縮側(cè)索硬化癥（ALS）的星形膠質(zhì)細(xì)胞相關(guān)透明包涵體。PROTEOSTAT?聚集小體檢測(cè)試劑盒提供了一種快速、特異、定量的方法來(lái)識(shí)別一個(gè)真正的細(xì)胞環(huán)境相關(guān)的神經(jīng)退行性疾病抑制劑。該固定的細(xì)胞檢測(cè)不需要具備生理活性的蛋白突變體或基因工程的細(xì)胞株。PROTEOSTAT?染料已經(jīng)在廣泛的條件下驗(yàn)證，與小分子調(diào)節(jié)劑一起使用，適用于具有治療價(jià)值的化學(xué)物的篩選。優(yōu)化抗體共定位研究，確定聚集蛋白物質(zhì)、自噬細(xì)胞和聚集小體的形成中涉及各種蛋白之間的相互作用。

◆試劑盒組成

   

試劑

包裝

ProteoStar? Aggresome Detection Reagent

10 μl

Hoechst 33342 Nuclear Stain

50 μl

Proteasome Inhibitor (MG-132)

120 nM

10X Assay Buffer

25 ml

優(yōu)點(diǎn)?特色

1、特點(diǎn)

●　可靠、簡(jiǎn)便、精確的檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)聚集反應(yīng)。
●　采取了細(xì)胞固定檢測(cè)方法，該方法是抗體共定位研究的優(yōu)選方法。
●　可用于流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。
●　基于細(xì)胞的靈敏的藥物反應(yīng)分析方法。

●　不需分離目的的蛋白或稀釋樣品與常規(guī)緩沖液兼容
●　在熒光微孔板中即可進(jìn)行簡(jiǎn)單、靈敏、均一地檢測(cè)
●　可與其他檢測(cè)手段聯(lián)用，獲得更精確的結(jié)果
●　可檢測(cè)不同蛋白的聚集
●　可檢測(cè)蛋白多肽聚集程度，可用于篩選蛋白
●　與傳統(tǒng)蛋白聚集檢測(cè)染料相比更靈敏，信號(hào)更明亮
●　聚集激活劑或抑制劑
●　在寬pH（4-10）和寬離子強(qiáng)度范圍都可使用

2、優(yōu)點(diǎn)

●　檢測(cè)樣品不需要具備生理活性的蛋白突變體或基因工程的細(xì)胞株。
●　能夠識(shí)別在聚集小體形成時(shí)聚集的蛋白和與其相關(guān)聯(lián)的蛋白的相互作用。
●　適用于具有治療價(jià)值的化學(xué)物的篩選。
●　首次實(shí)現(xiàn)了聚集小體積累的簡(jiǎn)易定量分析。
●　有助于在細(xì)胞環(huán)境中檢測(cè)神經(jīng)退行性疾病相關(guān)的聚集抑制劑。

◆案例?應(yīng)用

●　使用例 1：流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)聚集小體


用0.2% DMSO模擬培育Jurkat細(xì)胞或在37℃下用5μM的MG-132過(guò)夜培育。然后，用proteostat?染料孵育和固定細(xì)胞，不需清洗然后直接通過(guò)流式細(xì)胞儀，在FL3信道使用488nm的激光進(jìn)行分析。在MG-132處理的細(xì)胞時(shí)，紅色熒光信號(hào)增加了約3倍。上述的操作會(huì)影響蛋白質(zhì)聚集小體的檢測(cè)。

用0.2% DMSO模擬培育Jurkat細(xì)胞或在37℃下用5μM的MG-132過(guò)夜培育。用熒光素p62 Ab (1:500稀釋原液)培育細(xì)胞。清洗細(xì)胞后，通過(guò)流式細(xì)胞儀在FL1信道使用488nm的激光進(jìn)行分析。在MG132處理的細(xì)胞時(shí)，熒光素p62 Ab的抗體信號(hào)增加約2.5倍。



●　使用例 2：ProteoStat? 染料與熒光染料的應(yīng)用

用5μM MG-132培育帶有HeLa細(xì)胞的聚集小體12小時(shí)后（右圖），加入ProteoStat?聚集小體染料（紅色）和用Hoechst33342復(fù)染，然后進(jìn)行觀察。未經(jīng)培育的聚集小體（左圖）。




預(yù)先用5μMMG-132培育帶有HeLa細(xì)胞的聚集小體12小時(shí)后，用ProteoStat?聚集小體染料來(lái)染色觀察（左上圖綠色部分）；與AlexaFluor?647微管蛋白抗體（左下圖紅色部分）共定位；通過(guò)熒光顯微鏡觀察的合成圖像（右圖）。




預(yù)先用5μMMG-132培育帶有HeLa細(xì)胞的聚集小體12小時(shí)，用ProteoStat?聚集體小染料來(lái)染色觀察（左上圖），與熒光素p62的抗體（右上圖）共定位，通過(guò)熒光顯微鏡觀察的合成圖像（下圖）。


●　使用例 3


        不同攪拌速率對(duì)蛋白聚集的影響使用本產(chǎn)品檢測(cè)后，可知攪拌速度越快，蛋白聚集程度越大

●　使用例 4


        蛋氨酸被氧化后可抑制蛋白聚集藍(lán)色曲線為對(duì)照，沒(méi)有攪拌；在攪拌速度在300rpm下， 綠色曲線與紅色曲線分別表示蛋氨酸被氧化后的蛋白聚集情況。使用本產(chǎn)品檢測(cè)后，可知蛋氨酸被氧化后可抑制蛋白聚集。

●　使用例 5


α-syn混合物形式聚集在被內(nèi)化到M17神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系的細(xì)胞質(zhì)膜。用α-syn單體處理M17細(xì)胞，聲波處理α-SIGN PFFs或α-SYN混合物（M + F）。四天后，在固定M17細(xì)胞前，將其清洗3次，用 PROTEOSTAT?聚合染料（綠色）染色和用抗α-syn（紅）和β連環(huán)蛋白（灰色）免疫染色。比例尺= 20μm。作者提到“Fibril生長(zhǎng)和播種量α-synuclein蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中發(fā)揮重要作用?！贝藞D來(lái)自A-L Mahul-Mellier, et al.; Cell Death & Differentiation (2015). (doi:10.1038/cdd.2015.79).



●　使用例 6



在PROTEOSTAT?聚集小體檢測(cè)試劑（A）和Hoechst 33342核染色（B）的激發(fā)和發(fā)射光譜。

●　使用例 7


由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的自噬細(xì)胞產(chǎn)生的聚集小體和聚集小體類的包涵體，epi-熒光顯微成像圖。未經(jīng)處理的K562細(xì)胞（A）；加入5 mM MG-132溶液培育24小時(shí)（B）；加入50 mM CQ培育24小時(shí)（C）；加入100 nM毒胡蘿卜素（D）。在溫室下，用PROTEOSTAT? 染料(1:10,000稀釋)來(lái)固定染色細(xì)胞30分鐘。PROTEOSTAT? 的著色顯示 聚集體 和 ALIS呈紅色， DAPI 呈藍(lán)色。（Courtesy of the Flow Cytometry Core Facility, Blizard Institute, Queen Mary University of London, London, UK）



●　使用例 8 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)的細(xì)胞自噬產(chǎn)生蛋白聚集小體進(jìn)行流式細(xì)胞儀分析



分別25，50，75mmCQ，100nM的毒胡蘿卜素（TG）或5mM的MG-132處理K562細(xì)胞24小時(shí)。然后在溫室下用PROTEOSTAT?染料（1：10,000稀釋）固定并透化培育細(xì)胞30分鐘。接著在BD LSR II的藍(lán)色610/20nm的信道分析細(xì)胞（30,000）。Courtesy of the Flow Cytometry Core Facility, Blizard Institute, Queen Mary University of London, London, UK.

●　使用例 9




分別使用毒胡蘿卜素（Tg，0.1微米），25，50和75微米氯喹（CQ）處理K562 細(xì)胞24小時(shí)，來(lái)誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和不完全自噬細(xì)胞。采用陽(yáng)性對(duì)照，加入蛋白酶體抑制劑，鎂 132 (5 μ M)培育 24小時(shí)。固定并透化沉淀的細(xì)胞。接著根據(jù)說(shuō)明書(shū)的指示，在室溫下用 300 μ l PROTEOSTAT? 聚集小體檢測(cè)試劑盒 （Enzo Life Sciences）培育細(xì)胞30分鐘，加入1 微克/毫升 DAPI （用來(lái)測(cè)定細(xì)胞周期）。S值聚集小體小傾向的因子（APF）相對(duì)增加，G1和G2m的S值是通過(guò)每次細(xì)胞處理后檢測(cè)的結(jié)果和對(duì)照組相比而得出。S期和G1相比，ER 應(yīng)激誘導(dǎo)劑、Tg和 50 μ M CQ的聚集小體數(shù)量呈上升趨勢(shì)，同時(shí)顯示蛋白酶體抑制劑，MG-132和50μMCQ下降的聚集小體數(shù)量在G2M S期比對(duì)照水平更低。Courtesy of the Flow Cytometry Core Facility, Blizard Institute, Queen Mary University of London, London, UK.