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X-α-Gal是一種酵母半乳糖苷酶 (MEL1) 的顯色底物，用于在培養(yǎng)基上直接檢測GAL4系統(tǒng)的酵母雙雜交作用。通過藍(lán)白顏色篩選，快速和簡便地識別陽性的藍(lán)色克隆，無需費(fèi)時的β-半乳糖苷酶報告基因檢測。

X-α-Gal檢測酵母MEL1基因的激活，MEL1是GAL4酵母雙雜交系統(tǒng)的一個報告基因，編碼分泌型的α-半乳糖苷酶。該酶可水解無色的X-α-Gal底物并最終產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物。表達(dá)α-半乳糖苷酶的酵母菌落在含有X-α-Gal的培養(yǎng)基上顯藍(lán)色，即陽性的雙雜交作用。

產(chǎn)品用途

1）α-半乳糖苷酶的顯色底物，形成藍(lán)色沉淀。在培養(yǎng)基上直接檢測酵母雙雜交相互作用，利用此底物可以省去雙雜交體系中的β-半乳糖苷酶溶液和filter-lift assays；

2）用于區(qū)分腸桿菌科內(nèi)的不同菌種以及區(qū)分雙歧桿菌和乳酸菌；

3）在組織化學(xué)中用于酶活性的檢測。

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。-20 oC保存。

注意事項

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

儲存液的配制及使用

一、涂布于預(yù)制平板：

1）溶解24 mg X-α-gal于6 mL DMF，終濃度為4mg/ mL的溶液。

2）涂布200 μL(15 cm) 或者100 μL（10 cm）X-α-gal 儲存液于預(yù)制平板上；

3）放于37℃培養(yǎng)箱至液體被吸收（由于DMF揮發(fā)性低，最長可放4小時）；

4） 將轉(zhuǎn)化細(xì)菌或酵母涂于平板上，于37℃或30℃培養(yǎng)直至藍(lán)色菌落出現(xiàn)。

二、直接加入瓊脂中：

1）溶解60 mg X-α-gal于3 mLDMF，終濃度為20 mg/ mL的溶液。

2）將已滅菌瓊脂培養(yǎng)基冷卻至50-55 ℃；

3）往已冷卻的培養(yǎng)基中直接加入2 mL -10 mL 20 mg/ mL X-α-Gal儲存液，混勻，快速倒平板。

攜帶MEL1基因的酵母菌株：

    Y2HGold、Y190、AH190、Y187、PG69-2A

X-Gal與X-α-gal不同：

    X-Gal是E.coli β-半乳糖苷酶（LacZ）的反應(yīng)底物，而X-α-gal是酵母α-半乳糖苷酶（MEL1）的反應(yīng)底物。X-α-gal用作酵母雙雜交系統(tǒng)中藍(lán)白篩選的篩選標(biāo)記。

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