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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

脫氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，縮寫DNase I，在大多數(shù)細(xì)胞和組織中都能發(fā)現(xiàn)的一種核酸內(nèi)切酶，偏好切割鄰近嘧啶的磷酸二酯鍵，產(chǎn)生5’端為磷酸基團(tuán)、3’端為羥基的多聚核苷酸，平均消化產(chǎn)物最小為多聚四核苷酸。Mg2+存在條件下，DNase I可隨機(jī)識(shí)別和切斷DNA任一條鏈上的任意位點(diǎn)；而在Mn2+存在條件下，DNase I識(shí)別DNA的兩條鏈并在幾乎相同的位點(diǎn)進(jìn)行切割。DNase I可水解多種形式DNA，如單鏈DNA、雙鏈DNA，甚至染色質(zhì)（其切割速率受組蛋白影響）。

脫氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，縮寫DNase I，最早從胰腺中分離而來(lái)，至今哺乳動(dòng)物胰腺也是最主要的來(lái)源之一。DNase I以兩對(duì)二硫鍵結(jié)合的多種糖蛋白混合形式存在。最佳的工作范圍是pH 7-8，DNase的活性依賴于Ca2+，并可被二價(jià)金屬離子如Co2+，Mn2+，Zn2+等激活。5mM Ca2+可保護(hù)酶使其不被水解，而0.1mM Ca2+可使酶失活速率降至原來(lái)的1/2。

Deoxyribonuclease I (DNase I) 脫氧核糖核酸酶I本品來(lái)自牛胰腺，色譜純化制備，常用于去除蛋白或RNA樣品中的DNA，或者用于向DNA中引入缺口使標(biāo)記堿基插入DNA。本品以含氯化鈣的凍干粉形式供應(yīng)，比活≥500 Kunit Units/mg蛋白。

產(chǎn)品性質(zhì)

CAS NO：9003-98-9

蛋白純度：≥80%(biuret)，色譜純化

比活力：≥500 Kunit Units/mg protein

活力定義：在50μl含40mM Tris-HCl, pH8.0，2.5 mM MgSO4，1mM CaCl2的反應(yīng)緩沖體系中，37℃，10min內(nèi)完全降解1μg λ-DNA所需的酶量即為一個(gè)活力單位。此反應(yīng)條件下得到的一個(gè)單位DNase活力約等于一個(gè)Kuntiz unit。

激活劑：多種二價(jià)金屬離子如Mg2+、Mn2+、Ca2+、Co2+、and Zn2+

抑制劑：β-巰基乙醇;螯合劑;SDS;肌動(dòng)蛋白;并沒(méi)有特異性抑制DNase I酶活的通用抑制劑，比如檸檬酸鹽抑制Mg2+活化的DNase I，但不能影響Mn2+激活的DNase I。

溶解性：溶于緩沖液（≥1mg/ml in 20mM Tris-HCl（pH 7.5）, 1mM MgCl2, 50% 甘油)

使用方法

一、   儲(chǔ)存液制備

將低溫保存的本品置于室溫回溫至少20min，低速短時(shí)離心后，加入適量緩沖液配制成至少≥1mg/ml儲(chǔ)存液（如：20mM Tris-HCl（pH 7.5）, 1mM MgCl2, 50% 甘油），根據(jù)一定用量分裝置于-20℃保存，至少1年穩(wěn)定。

二、   反應(yīng)緩沖液制備

建議1×反應(yīng)緩沖液：40mM Tris-HCl（pH 8.0）, 2.5mM (up to 10mM) MgSO4，1mM (up to 10mM) CaCl2

【注意】：當(dāng)起始原料含EGTA，EDTA，其他螯合劑，和/或高濃度鹽離子，此時(shí)反應(yīng)緩沖液需更高濃度的Mg2+和Ca2+。

三、使用步驟（作為參考，具體實(shí)驗(yàn)可做適當(dāng)調(diào)整）

2.1 往一個(gè)RNase-free PCR管內(nèi)加入：1μg RNA樣本；49 μl 1×反應(yīng)緩沖液；1 μl DNase I, 1 unit/ml；【注意：酶的實(shí)際比活力請(qǐng)見(jiàn)產(chǎn)品標(biāo)簽】，混勻。

2.2 37℃孵育10-15min。【注意：消化時(shí)間不要超過(guò)15min或消化溫度不要高于37℃，否則殘留的RNase A污染可能會(huì)開(kāi)始降解RNA】

2.3 加入1μl終止液（20mM EGTA，pH 8.0）結(jié)合Ca2+和Mg2+，之后于65-70℃失活10min，終止反應(yīng)?！咀⒁猓罕仨氃跓崾Щ钪凹尤虢K止液】

在不同的反應(yīng)緩沖體系內(nèi)，用來(lái)完全消化一定量DNA所需的DNase I量不同，請(qǐng)根據(jù)具體的工作體系或?qū)嶒?yàn)經(jīng)驗(yàn)來(lái)決定?！咀⒁猓蝴}濃度＞100mM會(huì)降低DNase I活性】

為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作

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