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產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品簡介

酶聯(lián)免疫分析技術(shù)（ELISA）廣泛用于抗原、半抗原或抗體的定量或定性分析，辣根過氧化物酶（HRP）及其偶聯(lián)物是 ELISA 技術(shù)常用的一種酶，能催化底物如 3,3'5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）發(fā)生顯色反應(yīng)，從而進行定量或定性分析。由于 TMB 比其他顯色底物具更高的靈敏度且無致癌性被廣泛使用，TMB 主要用于 ELISA，免疫斑點雜交或免疫組化等實驗，也有報道將其用于氯的檢測分析。通常 TMB 顯色試劑由多個組分構(gòu)成，必須在使用前進行配制，并且容易產(chǎn)生沉淀，使用相對不便且容易導致檢測結(jié)果不穩(wěn)定。本品采用全新的 TMB 顯色技術(shù)，將所有相關(guān)試劑全部配在一個溶液，即僅由單一溶液組成，不僅簡化了操作步驟，而且使檢測結(jié)果更加穩(wěn)定可靠。

本品專門為 ELISA 實驗而設(shè)計。檢測原理在于 HRP 或其他適當過氧化物酶能催化生成可溶的藍色產(chǎn)物，此時通常可在 370nm 測定吸光度。當顯色反應(yīng)被酸性溶液（如 0.5-2M H2SO4，0.5M HCl，1M H3PO4）終止后，產(chǎn)物由藍色轉(zhuǎn)為黃色，此時可在 450nm 測定吸光度。由于本品顯色敏感度高，線性濃度范圍較寬，極其適合用于定量 ELISA 分析。

本品用于 ELISA 檢測，每個樣品通常使用 0.1ml 顯色液，則 100ml 本品約檢測 1000 個樣品，500ml 本品約檢測 5000 個樣品。

保存與運輸方法

保存：2-8℃避光保存，2 年有效。

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1） 本品含TMB和H2O2，對人體有刺激性，請注意防護。

2） 如發(fā)現(xiàn)本品出現(xiàn)渾濁或顏色變?yōu)樗{色，請停止使用。

3） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法（ELISA）

1） 使用之前，取出適量單組份 TMB 顯色液，使其回到室溫再開始使用；

2） 參考 ELISA 檢測試劑盒的實驗步驟，當與 HRP 標記抗體孵育一段時間后，用適當洗滌液洗滌 3-5 次，每次 3-5min。

3） 洗滌完畢后，去除洗滌液，加入 100μl 單組份 TMB 顯色液。

4） 室溫避光孵育 5-30min 或更長時間（可長達 24h），直至顯色到預(yù)期深淺。【注意】：建議根據(jù)實驗需求選擇最佳試劑用量、顯色時間和反應(yīng)溫度。

5） 直接在 370nm 測定吸光度?；蛘呒尤?span> 100μl 0.5-2M H2SO4 終止反應(yīng)，隨后在 450nm 測定吸光度。

常用問題

1. 背景顯色太深

1）如果背景（沒有樣品的對照）顯色太深，一方面需考慮使用適當?shù)姆忾]液進行封閉，如商業(yè)化封閉液或者和一抗相同來源的血清（10%）進行封閉。另一方面，使用經(jīng)過適當吸附的二抗，以減小二抗的非特異性吸附。

2）可以考慮縮短顯色時間，或降低二抗?jié)舛取Ａ硗?，選擇適當強度的洗滌液，或延長洗滌時間也會有所幫助。

2. 沒有顯色或顯色太弱

1）適當提高一抗或二抗的濃度。檢測二抗效果，滴一滴稀釋二抗在離心管內(nèi)，檢測二抗是否被正常顯色。

2）可以考慮使用更加靈敏的放大檢測體系，例如生物素檢測體系。

3）可以適當延長顯色時間。

4）如果上述改進不能獲得預(yù)期效果，可以考慮更換效果更好的一抗或 ELISA 試劑盒。