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Human DiI-Low Density Lipoprotein (Human DiI-LDL) 紅色熒光標(biāo)記人源低密度脂蛋白
貨號(hào) | H8696 | 售價(jià)(元) | 2728 |
規(guī)格 | 500μg | CAS號(hào) |
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產(chǎn)品信息:
貨號(hào) |
名稱 |
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價(jià)格 |
H8696 |
Human DiI-Low Density Lipoprotein (Human DiI-LDL) 紅色熒光標(biāo)記人源低密度脂蛋白 |
500μg |
2728元 |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
低密度脂蛋白(Low Density Lipoprotein,簡(jiǎn)稱為LDL)是通過(guò)脂蛋白酯酶的水解作用,脫去極低密度脂蛋白(VLDL)中的甘油三脂,釋放游離脂肪酸轉(zhuǎn)化而來(lái)的。因甘油三酯的去除使得膽固醇所占比例提高,增加顆粒本身密度,從而得到LDL。LDL與脊椎細(xì)胞表面的受體特異性結(jié)合,然后通過(guò)受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用將膽固醇運(yùn)輸?shù)饺砀魈幖?xì)胞。因此,LDL可以用來(lái)研究受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用過(guò)程,尤其是在動(dòng)脈粥樣硬化等疾病中,血漿來(lái)源的LDL還可用于研究LDL在功能和代謝中的氧化作用。
紅色熒光標(biāo)記人源低密度脂蛋白(Human DiI-LDL)是標(biāo)記熒光探針Dil(1,1-dioctadecyl-3,3,3,3- tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate)的LDL,可以用來(lái)觀察培養(yǎng)細(xì)胞的LDL結(jié)合位點(diǎn),或篩選LDL受體表達(dá)缺陷型細(xì)胞突變株。也可以通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)評(píng)估細(xì)胞受體水平,或檢測(cè)組織內(nèi)的受體水平。 DiI-LDL是研究細(xì)胞內(nèi)吞作用非常好的標(biāo)記物。
warbio提供的Human DiI-LDL為無(wú)菌包裝,可以直接稀釋使用。除提供DiI-LDL,我們還提供不帶標(biāo)記的LDL,以及修飾化的LDL如乙酰化LDL(Ac-LDL),以及氧化修飾的LDL(Ox-LDL)。
產(chǎn)品屬性
濃度:0.8-3.0 mg/ml
外觀:乳狀液體
吸光度比例:Dil/Protein=555nm/275nm=1.30
緩沖液組分:0.02 mM EDTA in PBS, pH 7.4
運(yùn)輸與保存方法:冰袋運(yùn)輸;4℃無(wú)菌,建議避光,收到貨后穩(wěn)定保存6周。切忌凍存!
制備與操作方法
純化的人健康血漿來(lái)源的LDL直接標(biāo)記上DiI熒光探針,然后通過(guò)超速離心以及透析的方法純化回收標(biāo)記產(chǎn)物,并濾膜過(guò)濾除菌。純化的DiI-LDL溶于含0.02 mM EDTA的PBS,pH 7.4中。
操作步驟
a) 無(wú)菌條件下,將DiI-LDL用細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋至25-50 μg/ml。
b) 加入活細(xì)胞內(nèi),37℃培養(yǎng)4-5小時(shí)。
c) 孵育結(jié)束,吸去含有Human DiI-Ox-LDL的培養(yǎng)基,并用無(wú)探針的培養(yǎng)基洗幾次。
d) 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。
1) 熒光顯微鏡觀察
采用標(biāo)準(zhǔn)的羅丹明激發(fā):發(fā)射濾光片(或建議使用波長(zhǎng)為:Ex/Em=549nm/565nm);若需要請(qǐng)使用含3%甲醛的PBS進(jìn)行固定,切勿使用甲醇或丙酮固定,因Dil易溶于有機(jī)溶劑。注:需設(shè)陽(yáng)性細(xì)胞以做對(duì)照。
2)細(xì)胞分選(流式細(xì)胞術(shù))
胰蛋白酶處理細(xì)胞或者加入EDTA制成單細(xì)胞懸液,選用合適的已標(biāo)記純化細(xì)胞用作陰性和陽(yáng)性對(duì)照,從而進(jìn)行流式分選設(shè)門(gate)。(建議使用波長(zhǎng)為Ex: 488/514/549nm; Em: 565nm)。
注意事項(xiàng)
本品的稀釋工作液極不穩(wěn)定,建議即配即用;
長(zhǎng)期貯存可能會(huì)有沉淀析出,屬于正?,F(xiàn)象,低速離心2 min去除沉淀即可使用;
LDL與LDL受體的結(jié)合需要Ca2+和Mn2+的參與,過(guò)量EDTA的存在會(huì)抑制其結(jié)合;
為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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