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產(chǎn)品信息

產(chǎn)品簡介

全能核酸酶，又稱廣譜核酸酶，英文名稱Benzonase Nuclease，一種來源于Serratia Marcescen的非特異性核酸內(nèi)切酶，可在鏈內(nèi)任意核苷酸間進(jìn)行切割，將核酸完全消化成3-8個(gè)堿基長度的5-單磷酸寡核苷酸，能夠在非常廣泛的條件下（6M urea，0.1 M Guanidine HCl，0.4% Triton X100，0.1% SDS，1 mM EDTA，1 mM PMSF）降解所有形式的（雙鏈，單鏈，線狀，環(huán)狀，天然或變性）DNA和RNA，廣泛用于去除生物制品中的核酸。

本產(chǎn)品由經(jīng)基因工程改造的真核生物酵母菌表達(dá)純化所得，不含原核生物表達(dá)體系自身的細(xì)菌內(nèi)毒素，不僅應(yīng)用在科研研究中，作為培養(yǎng)細(xì)胞上清和細(xì)胞裂解液去粘度的首選酶制劑，去除核酸干擾提高后續(xù)蛋白純化或功能研究；而且應(yīng)用在疫苗工業(yè)、蛋白和多糖類制藥工業(yè)，去除宿主殘留核酸，大大降低疫苗和蛋白類產(chǎn)品核酸污染至皮克級別，提高制品生物功效。

本品以無菌液體酶的形式提供，儲(chǔ)存于緩沖液（20mM Tris-Cl pH8.0，2mM MgCl₂，2mM NaCl，50%甘油）中，無色透明液體。

全能核酸酶作用條件

注：1）最適條件為全能核酸酶釋放≥90%活力的條件，可作用條件為全能核酸酶釋放≥15%活力的條件；2）全能核酸酶活力定義為在37℃，pH 8.0反應(yīng)條件，2.625 mL反應(yīng)體系中，在30 min內(nèi)使△A₂₆₀吸收值變化1.0（相當(dāng)于完全消化37 μg鮭魚精DNA成為寡核苷酸）所用的酶量定義為一個(gè)活性單位（U）。

產(chǎn)品性質(zhì)

使用方法

1）細(xì)胞處理：a.貼壁細(xì)胞去除培養(yǎng)基，用PBS洗后，1 mL RIPA裂解液（或其他哺乳動(dòng)物細(xì)胞裂解液）加10-20 uL全能核酸酶，室溫或冰上孵育5-30 min，收集裂解液，離心取上清即可進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。

b.懸浮細(xì)胞離心收集后，在離心管中加1 mL RIPA裂解液（或其他哺乳動(dòng)物細(xì)胞裂解液）加10-20 uL全能核酸酶，室溫或冰上孵育5-30 min，收集裂解液，離心取上清即可進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。

2）組織樣品：將30-100 mg動(dòng)物或者植物組織研磨充分后，加入100-200 uL裂解液，同時(shí)加入加5-10 uL全能核酸酶，室溫或冰上孵育5-30 min，收集裂解液，離心取上清即可進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。

3）大腸桿菌或者其他細(xì)菌：細(xì)菌離心收集后，用裂解液裂解或者研磨破碎后，每1 mL加1-5 uL全能核酸酶，室溫孵育30 min，收集裂解液，離心取上清即可進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。

注：若溶液為高鹽溶液，偏酸性或者偏堿性，含有較高濃度的去垢劑、變性劑，應(yīng)適當(dāng)增加酶量或孵育時(shí)間。

運(yùn)輸和保存方法

冰袋運(yùn)輸。-20℃保存，有效期2年。若是打開包裝后并4℃放置超過一周，建議過濾除菌防止微生物污染。

注意事項(xiàng)

為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操

常見問題：

Q. 產(chǎn)品應(yīng)如何稀釋？

A：正常建議稀釋比例(終濃度)為1:1000-1:20000，其中時(shí)間、溫度、稀釋比例為影響反應(yīng)的正面因素。

Q. 產(chǎn)品能否可以減少用量？

A：如希望減少用量，可酌情提高反應(yīng)溫度或延長時(shí)間。

Q. 使用該產(chǎn)品進(jìn)行消化反應(yīng)的抑制因子有哪些？

A：在含有以下物質(zhì)的體系中，全能核酸酶的活性會(huì)降低50%或以上：>150 mM一價(jià)陽離子，>100 mM磷酸鹽，>100 mM硫酸銨，>100 mM鹽酸胍，>0.1% SDS，>1% Triton X-100，>1% Tween 20。

Q. 怎樣滅活全能核酸酶？如何去除？

A：采用EDTA螯合金屬離子會(huì)可逆地抑制全能核酸酶活性，極端條件會(huì)造成不可逆失活，例如100 mM NaOH，70℃處理30 min等。全能核酸酶可采用陰離子交換柱或氣相色譜法從目的產(chǎn)物中分離出去。

Q. 全能核酸酶與蛋白酶抑制劑混合物是否兼容？

A：全能核酸酶與不含EDTA的蛋白酶抑制劑混合物兼容。若含有EDTA且濃度>1 mM時(shí)，會(huì)抑制核酸酶活性，建議：如果必須加EDTA，按照2倍EDTA濃度補(bǔ)加Mg²⁺。

Q. 產(chǎn)品的用量是多少？

A：需要根據(jù)重懸菌體所需裂解液的體積來確定需要酶的量。若普通蛋白純化，則需要濃度為25 U/mL；核蛋白則需要100 U/mL；病毒表達(dá)蛋白純化需要濃度為12.5 U/mL；疫苗產(chǎn)品需要量為0.9-1.1 U/mL。

Q. 產(chǎn)品的穩(wěn)定性如何，如果不小心在室溫放置幾天后，酶活性會(huì)受到怎樣的影響？

A：室溫2-3天，對活力影響不大。

Q. 全能核酸酶能在尿素環(huán)境消化核酸嗎？

A：全能核酸酶在尿素濃度為6 M時(shí)活性先增加，隨著時(shí)間延長活性又有降低；在尿素為7 M時(shí)，全能核酸酶15分鐘后出現(xiàn)變性并失活。但是在酶失活前多數(shù)核酸已經(jīng)降解了?？赏ㄟ^提高全能核酸酶使用濃度補(bǔ)償7 M尿素的影響。

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