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產(chǎn)品信息

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

LysoSensor探針是一種區(qū)分酸性細(xì)胞器的熒光pH指示劑。該系列染料屬于向酸性探針，能夠聚集在呈質(zhì)子化的酸性細(xì)胞器上。這一質(zhì)子化過(guò)程使得因弱堿性側(cè)鏈而封閉熒光的探針得以熒光釋放，促使熒光信號(hào)增強(qiáng)。因此，LysoSensor探針遇酸后熒光信號(hào)呈現(xiàn)pH依賴(lài)性的增強(qiáng)。

本品LysoSensor? Yellow/Blue DND-160 (PDMPO)是一種用于測(cè)定溶酶體pH值的比率測(cè)量型探針，也是LysoTracker?系列探針中唯一的一種pH依賴(lài)型顯示雙激發(fā)和雙發(fā)射波長(zhǎng)的熒光探針，該探針在中性環(huán)境中產(chǎn)生藍(lán)色熒光，但當(dāng)所處環(huán)境變?yōu)槠嵝詴r(shí)，則發(fā)射黃色熒光。本品以溶于無(wú)水DMSO的1mM儲(chǔ)存液形式提供。

產(chǎn)品性質(zhì)

分子式（Molecular Formula）：C20H22N4O3

分子量（Molecular Weight）：366.4188

Ex/Em：Ex=329nm,384nm   Em=440nm,540nm

pKa：～4.2

步驟說(shuō)明

使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對(duì)其進(jìn)行簡(jiǎn)短離心使DMSO溶液集中于管底。最佳工作濃度需根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)要求、細(xì)胞類(lèi)型、細(xì)胞或組織的膜通透性等進(jìn)行優(yōu)化。

1. 工作液的配制

利用培養(yǎng)基或合適的緩沖液將1mM 儲(chǔ)存液稀釋至工作濃度，推薦工作液濃度至少為1μM；

注1：為了降低探針加載過(guò)度可能引起的假陽(yáng)性，建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。2）若細(xì)胞在染色后于不含染料的培養(yǎng)基中孵育，會(huì)觀察到熒光信號(hào)的衰減和細(xì)胞的空泡化現(xiàn)象。

注2：工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。

2. 染色

2.1 對(duì)于貼壁細(xì)胞

1）將細(xì)胞置于培養(yǎng)皿中的蓋玻片上，加入合適培養(yǎng)基，使其爬片生長(zhǎng)。

2）待細(xì)胞生長(zhǎng)到合適豐度，吸除培養(yǎng)液，加入適量37℃預(yù)熱的含探針工作液。于生長(zhǎng)狀態(tài)下孵育30min～2h（具體孵育時(shí)間需根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型而定）。

      注意：對(duì)LysoSensor? YellowBlue DND-160 (PDMPO)內(nèi)化過(guò)程的動(dòng)力學(xué)研究表明，活細(xì)胞攝取此染料僅需數(shù)秒即可。缺點(diǎn)在于此探針可能引起溶酶體產(chǎn)生“堿性效應(yīng)Alkalizing effect”，也就是說(shuō)過(guò)長(zhǎng)孵育時(shí)間會(huì)誘導(dǎo)溶酶體pH值提高。建議僅當(dāng)該探針于37℃孵育細(xì)胞1-5min才可用作pH指示劑。

3）利用新鮮培養(yǎng)基替換上述染色液并在熒光顯微鏡（含合適濾片）下觀察。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長(zhǎng)染色時(shí)間。

2.2 對(duì)于懸浮細(xì)胞

1）離心，吸除上清。

2）利用37℃預(yù)熱的探針工作液重懸細(xì)胞，于生長(zhǎng)狀態(tài)下孵育30min～2h（具體時(shí)間需根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型而定）。

注：對(duì)LysoSensor? YellowBlue DND-160 (PDMPO)內(nèi)化過(guò)程的動(dòng)力學(xué)研究表明，活細(xì)胞攝取此染料僅需數(shù)秒即可。缺點(diǎn)在于此探針可能引起溶酶體產(chǎn)生“堿性效應(yīng)Alkalizing effect”，也就是說(shuō)過(guò)長(zhǎng)孵育時(shí)間會(huì)誘導(dǎo)溶酶體pH值提高。建議僅當(dāng)該探針于37℃孵育細(xì)胞1-5min才可用作pH指示劑。

3）離心，吸除染色液，加入新鮮培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

4）置于熒光鏡下觀察。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或加長(zhǎng)染色時(shí)間。

注：對(duì)于懸浮細(xì)胞，也可將細(xì)胞貼附于經(jīng)BD Cell-Tak處理過(guò)的蓋玻片上，然后使用類(lèi)似于貼壁細(xì)胞的方法進(jìn)行染色。

注意事項(xiàng)

1）不能儲(chǔ)存在無(wú)霜冰箱，建議按照單次用量分裝于-20℃凍存。

2）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

運(yùn)輸和保存方法

冰袋運(yùn)輸。-20℃避光干燥保存，避免反復(fù)凍融，有效期6個(gè)月。

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