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產品介紹

細胞內pH在許多細胞事件中起著重要的調節(jié)作用，包括細胞生長，鈣調節(jié)，酶活性，受體介導的信號轉導，離子轉運，內吞作用，趨化性，細胞粘附和其他細胞。近年來，pH敏感性熒光染料已被廣泛應用于監(jiān)測細胞內pH的變化。使用熒光pH指示劑的成像技術還允許研究人員使用其他技術（如微電極）實現(xiàn)更大的空間分辨率和采樣密度來研究這些過程。其中，2'，7'-雙 - （2-羧乙基）-5-（和-6） - 羧基熒光素（BCECF）是最常用的pH探針，因為它可用于比率監(jiān)測細胞pH。 BCECF AM是BCECF的細胞滲透型。單一異構體化合物BCFL，AM使得pH測量比BCECF，AM更加可重復，它由相當多的不同異構體組成。BCECF是一種比率型pH熒光指示探針，Ex=503 nm，Em=530 nm。聯(lián)合現(xiàn)代化的熒光成像技術，使其在涉及pH變化的多種實驗中得到廣泛應用，如細胞生長調節(jié)，鈣調節(jié)，受體介導的信號轉導，鐵離子運輸內吞等。BCECF,AM是BCECF基礎上引入乙酰甲氧基甲酯（AM）基團，增加了疏水性，使其能夠輕易穿透活細胞膜。BCECF,AM本身沒有熒光，穿透細胞膜進入細胞后被細胞內的酯酶剪切形成BCECF，后者被滯留在細胞內，隨pH變化發(fā)出綠色熒光.

 產品性質

 中文名稱：BCECF AM

英文名稱：2',7'-bis-(2-carboxyethyl)-5-(and-6)-carboxyfluorescein,acetoxymethyl ester分子式：C25H24N6O·3HCl

分子量：808.69

CAS：無

純度：≥95%（HPLC）

光譜特性：Ex / Em = 503 / 528nm

溶解性：二甲基亞砜（DMSO）

存儲條件：-20 ℃避光保存。

使用說明：

標準細胞的測定方案

在生長培養(yǎng)基中制備細胞?

添加等體積的BCECF，AM染料上樣溶液（100μL/孔用于96孔板）在37℃下孵育1小時?

洗滌并用HHBS替換?

讀取熒光，在Ex / Em = 490 / 535 nm，加入50μL/孔化合物（或505/535和430/535 nm比例）

注意：以下是標準單元負載的推薦步驟。 該步驟僅提供指導，應根據(jù)具體需要進行修改。

1.根據(jù)需要準備細胞。 例如，將粘附細胞在生長培養(yǎng)基中以40,000至80,000個細胞/孔/100μL過夜，96孔或10,000至20,000個細胞/孔/25μL，用于384孔板。

注意：應對每個細胞系進行單獨評估，以確定最佳細胞密度。

2.準備BCECF，AM染料加載溶液：

2.1在高質量無水DMSO中制備2至20 mM BCECF，AM原液。 應立即使用原液。 任何未使用的溶液需要等分并在<-20 oC重新冷凍。

注意：避免反復凍融循環(huán)，避免光照。

2.2在Hanks和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）中制備5-50 uM BCECF，AM染料加載溶液

3.運行pH分析

3.1將100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）BCECF，AM染料加載溶液加入細胞板（來自步驟2.3）。

注意：如果您的化合物干擾血清，重要的是用HHBS緩沖液替換生長培養(yǎng)基（96孔板100μL/孔或染料加載前384孔板25μL/孔）。

3.2將染料加載板在細胞培養(yǎng)箱中孵育30至60分鐘。

3.3用HHBS洗滌并更換染料加載溶液。

3.4使用HHBS或所需的緩沖液制備復合板。

3.5通過監(jiān)測Ex / Em = 490 / 535nm（在515nm處截止）或505 / 535nm和430 / 535nm（在515nm處截止）處的熒光進行pH測定以進行比率測量。 添加化合物為50μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）。

注意：化合物應在化合物添加后3至5分鐘內完成，但在測定開發(fā)過程中建議至少8分鐘的數(shù)據(jù)收集。

本產品對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。

      本BCECF AM在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。

      熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

      本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。

      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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