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產品信息：

產品簡介：

在細胞體外培養(yǎng)工作中，為了達到長期保存細胞的生物活性的目的，須將細胞進行冷凍保存，并在實驗需要的時候將其重新復蘇和培養(yǎng)。目前，細胞凍存最常用的技術是液氮冷凍保存法，主要采用添加適量保護劑使細胞緩慢降溫至指定溫度范圍，從而到達保護細胞的目的。

 沃博生物無血清細胞凍存液是面向數(shù)百種細胞研發(fā)出的專用凍存液產品。該產品添加了細胞沉降穩(wěn)定劑，可延緩細胞在凍存過程中的沉降速率，防止細胞互相擠壓，影響細胞凍存效果。另外，添加了細胞膜保護劑、滲透性細胞膜內保護劑、非滲透性細胞保護劑等多種冷凍保護劑，這些成分在溶液中同水分子結合，發(fā)生水合作用，弱化水的結晶過程使溶液的粘性增加從而減少冰晶的形成，能大大降低細胞在凍存過程中冰晶對于細胞的損傷，有效提高細胞復蘇存活率。該產品配方成分明確，不含血清、不含動物源性蛋白，可減少各類細菌、病毒和支原體等污染，保證凍存細胞的安全；不僅適用于常規(guī)細胞系、原代細胞，同時亦適合于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞。

與傳統(tǒng)凍存液相比，無需繁瑣費時的程序凍存步驟或價格高昂的程序降溫儀，可直接重懸細胞后置于-80℃，次日轉移到液氮完成整個凍存過程，節(jié)省大量的時間和精力。

產品優(yōu)勢：

省時省力——直接存放于-80℃冰箱凍存，無需程序降溫

安全性高——無血清，化學成分明確

高 品 質——細胞復蘇率在90%以上

使用方便——2-8℃即可穩(wěn)定保存，無需冷凍，即取即用

化學成分明確——沒有添加任何外源蛋白，減少細胞污染機會，同時減少外源蛋白對細胞正常生長和分化的影響

操作步驟

(一)細胞凍存

1、選擇對數(shù)生長期的細胞（90%左右），并保證在凍存前24h 內換液一次，收集細胞，并將細胞制備成單細胞懸液（貼壁細胞可能需要用胰酶消化），計數(shù)；

2、將細胞懸液1000r/min 離心5min，棄上清；

3、向細胞沉淀物中加入細胞凍存液，輕輕吹打，重懸細胞，使細胞密度達到5×10?～1×10?個/mL；

4、將上述細胞懸液按0.5ml～1.0ml 的量，分裝于無菌細胞凍存管內，擰緊管蓋，并做好標記；

5、將凍存管直接置于-80℃冰箱中，24 h后移入液氮長期保存。

(二)細胞復蘇

1、從液氮罐中取出凍存的細胞，立即放入37℃水浴鍋中快速解凍(操作時切勿使水浸沒凍存管口，以免造成細胞污染)；

2、待細胞凍存管中凍存液完全融化后，立即逐滴加入少量細胞完全培養(yǎng)基于該冷凍管中與細胞進行混合，再將細胞混合液從凍存管中移入含有8～10mL該細胞完全培養(yǎng)基的試管中，輕輕混合均勻；1000r/min離心5min，棄上清；

3、加入1～2mL完全培養(yǎng)基重懸細胞，按照合適的接種密度將細胞接種到細胞培養(yǎng)容器中，加入適量的已預熱的新鮮的細胞完全培養(yǎng)基；

4、輕輕搖晃培養(yǎng)器皿，使細胞分布均勻，靜置于37℃、飽和濕度細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

產品穩(wěn)定性及保存條件

1、置于2～8℃避光保存，有效期為1年；

2、本產品請于保質期內使用，超過保質期，必須放棄使用；

3、為確保產品質量，請避免反復凍融相關產品。

1、凍存細胞分裝至凍存管后，應減少在室溫/4℃存放時間，盡快移入到-80℃超低溫冰箱；

2、對于原代胚胎干細胞/iPS細胞/其它珍貴細胞樣本等凍存時，我們建議您在使用前，事先對所凍存的細胞進行至少為期1周的細胞凍存測試實驗，確認沒問題后再進行正式凍存；

3、本產品經3次0.22μm過濾除菌，使用本產品時應注意無菌操作，避免污染；

4、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作；

5、 本產品僅限科研使用。