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產(chǎn)品信息

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

SYBR Green I，一種靈敏度非常高的dsDNA熒光染料，常用于核酸瓊脂糖凝膠/聚丙烯酰胺凝膠電泳。SYBR Green I染料的最大激發(fā)波長(zhǎng)為497nm，但是在～290nm和～380nm處有二級(jí)激發(fā)峰。與DNA結(jié)合的SYBR Green I染料的熒光發(fā)射集中在520nm。因此，該染料可適用于多種凝膠檢測(cè)儀。

本品是溶于DMSO的SYBR Green I 10,000×染液。

運(yùn)輸和保存方法

冰袋運(yùn)輸。于-20°C避光保存，有效期1年。

注意事項(xiàng)

1）獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的艾姆斯試驗(yàn)表明SYBR Green I 的致突變性明顯比溴化乙錠要低得多，目前尚無(wú)關(guān)于SYBR Green I 染料對(duì)人體的致突變性或毒性的數(shù)據(jù)，但我們必須提醒用戶注意，該染料能與DNA結(jié)合，因此，它應(yīng)當(dāng)被看做潛在誘變劑，在使用前小心謹(jǐn)慎。另外，在處理DMSO儲(chǔ)存液時(shí)應(yīng)特別小心，因?yàn)镈MSO能促進(jìn)有機(jī)分子進(jìn)入組織。染料的處理應(yīng)當(dāng)符合當(dāng)?shù)氐囊?guī)定。

2）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法

【開(kāi)始使用前】

使用前將本品取出并回溫至室溫，使DMSO徹底解凍、溶液均一。于離心機(jī)上短暫離心確保所有溶液至管底。第一次使用時(shí)可將本品分裝成多個(gè)小份后凍存，小份染料將更快速熔解。

一、 染色

1 電泳后DNA染色

1）在瓊脂糖或非變性聚丙烯酰胺凝膠上進(jìn)行電泳。

【注】：TBE和TAE緩沖液均適合于SYBR Green I染料。

2）用TE、TAE或TBE將SYBR Green I進(jìn)行10000倍稀釋。

【注】：① SYBR Green I染色對(duì)pH敏感，為獲得最佳的靈敏度，應(yīng)確認(rèn)在染色溫度下染色液的pH值在7.5-8.0之間（pH8.0更佳）。

② 用水配制的染色液不如用緩沖液配制的穩(wěn)定，為得到較好靈敏度，必須在24h內(nèi)使用。

3）染液要充分覆蓋凝膠，室溫輕搖孵育10-40min。

【注】：① 推薦用塑料而不是玻璃容器來(lái)儲(chǔ)存染色液，應(yīng)為染料會(huì)吸附到玻璃表面。

       ② 染色過(guò)程避光進(jìn)行，建議在容器上加蓋鋁箔或置于暗處。

       ③ 凝膠厚度及瓊脂糖或聚丙烯酰胺的比例不同，染色時(shí)間將有所不同。

       ④ 無(wú)需脫色。

       ⑤ 染液可置暗處（最好是冷藏）放置至少1周，重復(fù)使用最多4次。

2 電泳前DNA染色

1）一般選擇配制成SYBR Green I預(yù)制凝膠來(lái)實(shí)驗(yàn)。

臨灌膠前將SYBR Green I儲(chǔ)存液按照1：10000倍稀釋到凝膠溶液中，預(yù)制成含有SYBR Green I染料的瓊脂糖或非變性聚丙烯酰胺凝膠。預(yù)制的SYBR Green I凝膠的DNA檢測(cè)下限（大約為30-40pg/條帶），略高于電泳后染色（＜20pg/條帶）。此外，在SYBR Green I凝膠中的DNA片段遷移率明顯比無(wú)染料凝膠中的相同片段慢。

2）作為DNA模板預(yù)染標(biāo)記。

一般而言，DNA在電泳前與染料工作液至少孵育15min。

二、 凝膠成像（紫外或藍(lán)光透射儀或紫外頂置光源直射）

可在紫外或藍(lán)光光源下輕松觀察到用SYBR Green I染色的DNA。

三、從雙鏈DNA中去除SYBR Green I

將SYBR Green I染色的DNA移至100mM NaCl中，加入2.5倍體積的無(wú)水或95%的乙醇。在冰上孵育約20min，在4℃離心至少10min。去除乙醇，并用70%乙醇洗滌沉淀。讓乙醇揮發(fā)，用TE重懸雙鏈DNA即可。

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